Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Essai fonctionnel pour l'endoderme définitif présumé de la souris et de l'homme à l'aide de cultures d'embryons entiers de poulet

Martina Johannesson, Henrik Semb, Palle Serup et Mattias Hansson

Introduction : Les cellules souches embryonnaires (CSE) représentent une source potentielle de cellules pour le traitement de maladies dégénératives telles que le diabète. Plusieurs études ont abordé la génération d'endoderme définitif (DE) à partir de cette source cellulaire en tentant de récapituler les événements de signalisation se produisant pendant l'embryogenèse. Cependant, la différenciation ultérieure de DE n'a pas permis de générer des cellules bêta productrices d'insuline fonctionnelles. Pour nous assurer que nous disposons du bon matériel de départ, nous devons caractériser complètement les DE dérivées des CSE, en évaluant si les cellules sont fonctionnellement équivalentes à leur homologue in vivo. Ainsi, le but de cette étude est de décrire une méthode permettant d'évaluer la fonctionnalité in vivo des DE dérivées des CSE.

Méthodes : Par différenciation dirigée, un DE putatif a été dérivé d'ESC humaines et murines. Ce DE putatif a ensuite été transplanté dans l'endoderme d'embryons de poulet pour déterminer toute occurrence d'intégration. Le DE putatif a été analysé par expression génique et protéique avant la transplantation et 48 h après la transplantation.

Résultats : Le DE putatif, dérivé des cellules souches embryonnaires humaines et murines, a été intégré avec succès dans l'endoderme du poulet. Les gènes spécifiques de l'endoderme ont été exprimés dans le DE putatif avant l'intégration et les protéines spécifiques de l'endoderme ont été évaluées 48 h après la transplantation.

Conclusions : Nous décrivons la procédure méthodologique détaillée pour la transplantation de DE putatifs dérivés d'ESC, ainsi que l'analyse ultérieure de la migration et du développement des cellules greffées. Nos résultats montrent que les DE putatifs s'intègrent à l'endoderme du poulet et participent au développement de l'intestin du poulet, indiquant la génération de DE fonctionnels à partir d'ESC. Ce test fonctionnel peut être utilisé pour évaluer la génération de DE fonctionnels dérivés d'ESC humaines et murines et fournit un outil précieux pour la caractérisation cellulaire. Il s'agit d'une étape initiale importante dans le processus de différenciation vers des cellules bêta entièrement fonctionnelles.