Journal de pathologie végétale et de microbiologie

Abstrait

Une méthode simple et efficace pour extraire l'ADN de S. Rolfsii pour les études de diversité basées sur la PCR

Homme AS, Kato F et Mukankusi CM

Les méthodes actuelles d'extraction de l'ADN de Sclerotium rolfsii utilisent de nombreux produits chimiques organiques dangereux pour extraire l'ADN de haute qualité. L'extraction de l'ADN est encore compliquée par les exopolysaccharides qui se lient à l'ADN et le rendent mucilagineux. Nous avons développé un protocole simple et efficace pour extraire l'ADN de haute qualité de S. rolfsii. Notre méthode utilise un tampon d'extraction d'ADN qui contient du dodécyl sulfate de sodium et de la protéinase K pour inactiver les protéines et une concentration élevée en sel pour précipiter les exopolysaccharides. Elle n'utilise ni phénol, ni chloroforme, ni alcool isoamylique pendant le processus d'extraction de l'ADN. Elle ne nécessite pas non plus de lyophilisation des mycéliums ni de broyage à l'azote liquide. En utilisant notre méthode, une quantité suffisante d'ADN pur (moyenne A260 : A280 = 1,91 ± 0,001) (moyenne = 55,57 ± 0,002 ng/µl) a été obtenue à partir de 100 mg de mycélium. L'ADN a pu être amplifié par PCR en utilisant des amorces de répétition de séquences simples et des amorces ciblant la région d'espacement interne transcrite de S. rolfsii. Notre méthode sera très utile dans les laboratoires qui n'ont pas accès à l'azote liquide et aux installations de lyophilisation et servira de catalyseur aux études phylogénétiques basées sur la PCR de cet important pathogène du haricot commun.