Journal de pathologie végétale et de microbiologie

Abstrait

Une méthode simple, rapide et efficace d'isolement de l'ARN du virus de la mosaïque du pépino à partir des tomates

Amal Souiri, Mustapha Zemzami, Khadija Khataby, Hayat Laatiris, Saaid Amzazi et Moulay Mustapha Ennaji

La principale préoccupation dans la détection moléculaire des agents pathogènes viraux à ARN dans les plantes est l'obtention d'une bonne qualité de l'ARN extrait. Diverses méthodes d'isolement des ARN à partir de tissus riches ou pauvres en polysaccharides et d'autres plantes récalcitrantes sont disponibles. Cependant, l'utilisation de méthodes chronophages et consommatrices de réactifs et de produits chimiques dangereux est quelque peu lourde et problématique, en particulier lorsqu'elle n'est pas nécessaire à des fins spécifiques comme l'isolement de l'ARN viral à partir de fruits de tomate, d'où l'objectif de cet article. Nous décrivons une méthode alternative, simple et rapide pour préparer l'ARN viral à partir de fruits de tomate sans étapes d'extraction et de purification de l'ARN, cas du virus de la mosaïque du pépino ( PepMV ).

La méthode utilise un traitement mécanique et une suspension dans l'eau. La qualité de l'ARN obtenu a été jugée par des mesures spectrométriques et validée par des tests RT-PCR. Le protocole utilisé a été comparé à la méthode TRIzol habituelle. Les résultats ont montré que le rendement et la qualité de l'ARN obtenu en utilisant la méthode proposée sont efficaces et très performants par rapport à la méthode TRIzol. De plus, la méthode développée a permis avec succès une détection sensible et reproductible des bandes prédites de PepMV en RT-PCR. Ainsi, la détection moléculaire de PepMV à partir des fruits de tomate peut être effectuée en routine sans isolement fastidieux de l'ARN. De plus, cela rendra le diagnostic d'autres virus à ARN infectant les cultures de tomates plus facile et moins long, par rapport aux autres méthodes réalisées avec des kits commerciaux coûteux et celles impliquant des produits chimiques toxiques. Enfin, la méthode établie décrite contribuera efficacement aux stratégies des programmes phytosanitaires et de certification des cultures de tomates dans le monde entier.