Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrait

Un système de surveillance de la contraction du gel de collagène tridimensionnel qui utilise un réseau trabéculaire porcin pour le dépistage des agents anti-pression intraoculaire

Hiroyoshi Kasai, Mitsue Ishisaka, Eiichi Shirasawa et Hideaki Hara

L'état contractile du réseau trabéculaire (TM) est censé affecter l'écoulement de l'humeur aqueuse et la pression intraoculaire (PIO). Il a été suggéré que la relaxation du TM peut augmenter l'écoulement conventionnel en augmentant la porosité des tissus et entraîner une baisse de la PIO. Par conséquent, il pourrait être une cible thérapeutique pour le glaucome. En conséquence, nous avons étudié les effets de divers agents sur la contractilité des cellules du réseau trabéculaire porcin (pTM) en culture à l'aide d'un test sur gel de collagène tridimensionnel (3D), afin de développer une méthode de criblage pour identifier de nouveaux agents anti-PIO. Nous avons identifié les cellules pTM, obtenues à partir de globes oculaires porcins, par la forme cellulaire et l'expression des récepteurs des lipoprotéines de faible densité (LDL). Les cellules pTM, une fois intégrées dans des gels de collagène, ont montré une activité contractile dépendante de la concentration de sérum bovin fœtal (FBS). Différents inhibiteurs de kinases, notamment les inhibiteurs de la kinase cycline-dépendante cellulaire (rescovitine), de la protéine kinase rho et Ca2+-dépendante (Y-27632), de la tyrosine kinase (tyrphostine AG879), de la phosphatidylinositol 3-kinase (bisindolylmaléimide I, BIM I) et de la Ca2+/calmoduline kinase (chélerythrine), ont fortement inhibé la contraction du gel de collagène. Cette contraction a également été inhibée par l'acide éthacrynique, par des inhibiteurs de la Na+, K+-ATPase (ouabaïne), Ca2+-ATPase (thapsigargine) et 3-hydroxy-3-méthylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) réductase, par un inhibiteur non sélectif de la phosphodiestérase (papavérine) et par des agonistes de l'adénosine A2 (métrifudil) et des récepteurs cannabinoïdes (CP-55940). De plus, le BIM I, la simvastatine, le BQ-123 et le CP-55940 ont montré une cytotoxicité partielle. Les activités inhibitrices de la chélérythrine et de la thapsigargine ont également été attribuées à la cytotoxicité. Ces résultats indiquent que ce système de surveillance in vitro de la contraction du gel de collagène en 3D pourrait être utilisé comme une méthode de dépistage rapide et sensible pour identifier de nouveaux agents qui induisent la relaxation des cellules pTM et pourrait détecter simultanément les effets principaux et secondaires.