Technologie génétique

Abstrait

Application de la recombinaison homologue dirigée par CRISPR/cas9 à la génération de cellules tumorales humaines avec élimination conditionnelle d'un locus de microARN lié à l'X

Aurélie Van Tongelen, Axelle Loriot, Olivier De Backer et Charles De Smet

L'étude de la fonction cellulaire des microARN nécessite des stratégies génétiques pour générer leur perte de fonction. Récemment, une nouvelle approche de délétion génomique ciblée a été proposée, qui repose sur l'induction de coupures d'ADN spécifiques à un site avec des complexes ribonucléoprotéiques Cas9/gRNA, combinée à l'insertion dépendante de la recombinaison homologue de cassettes contenant des séquences pour les systèmes Cre-lox ou FLP-FRT. Nous fournissons ici un rapport technique décrivant l'application de cette procédure de recombinaison homologue dirigée par CRISPR/Cas9 à la génération de cellules tumorales humaines dans lesquelles l'inactivation conditionnelle d'un groupe de microARN lié à l'X (miR-105/miR-767) peut être induite. Nous décrivons les étapes successives du génie génétique et de la sélection de clones cellulaires qui nous ont permis de générer des cellules avec l'édition génomique attendue.