Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Expression basée sur le promoteur d'arabinose de l'hormone de croissance humaine recombinante biologiquement active dans E. coli : stratégies de surexpression et méthodes de purification simples

Sudheerbabu Soorapaneni, Anjali Apte-Deshpande, Ketaki Sabnis-Prasad, Jitendra Kumar, Veena A Raiker, Prakash Kotwal et Sriram Padmanabhan

Un système d'expression basé sur un promoteur d'arabinose dans E. coli pour la production et la purification de l'hormone de croissance humaine recombinante (rhGH) a été conçu et mis en œuvre. Les études en flacon agité ont indiqué des quantités appréciables de rhGH exprimées dans le vecteur pBAD24 modifié (pBAD24M) par rapport au vecteur pBAD24 d'origine. Alors que les niveaux de rhGH atteignaient seulement 75 mg l ^-1 avec pBAD24 dans un bioréacteur, ils atteignaient ~1860 mg l ^-1 avec le vecteur pBAD24M dans des conditions similaires, comme en témoigne la densitométrie des protéines résolues par électrophorèse sur gel de polyacrylamide-dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE). La protéine rhGH a été purifiée avec succès des corps d'inclusion après dénaturation à l'urée par deux étapes simples de chromatographie par échange d'ions avec une récupération globale de 40 %, soit ~750 mg l ^-1 de hGH purifiée, ce qui constitue le rendement le plus élevé de rhGH purifiée rapporté à ce jour. Une telle rhGH bactérienne purifiée a été caractérisée par une séquence N-terminale, des études de spectres CD, une analyse d'empreinte de masse et une analyse sur un bioanalyseur Agilent 2100. La bioactivité de la rhGH purifiée était comparable à celle de la hGH (somatotropine) disponible dans le commerce.