Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Combinaison de la transcription inverse et de l'analyse du polymorphisme de longueur des fragments de restriction multienzymatique pour la détection rapide d' Escherichia coli

Akifumi Hosoda, Arata Komaba, Michiru Kishimoto et Hiroto Tamura

Des méthodes de culture sont utilisées pour surveiller les micro-organismes pathogènes dans les aliments. Cependant, les méthodes actuelles nécessitent quelques jours pour produire des résultats, et les produits sont souvent mis en vente avant que les résultats de l'analyse microbiologique ne soient disponibles. Nous avons développé un système d'extraction d'ARN et de détection de micro-organismes en utilisant des échantillons alimentaires modèles inoculés avec Escherichia coli K-12 et O157:H7 (GTC 14536) (0 UFC/g et 1×101–104 UFC/g). Avant l'extraction de l'ARN, des cellules vivantes ou mortes ont été inoculées dans les échantillons alimentaires, les échantillons ont été homogénéisés et les ARN extraits ont été utilisés pour synthétiser des ADNc à l'aide de 6-mer aléatoires. La PCR a été utilisée pour analyser les gènes cibles et les produits de PCR ont été digérés avec deux enzymes de restriction (HhaI et HaeIII) pour analyser le polymorphisme de longueur des fragments de restriction (RFLP). La PCR a confirmé l'extraction d'ARN et la synthèse d'ADNc d'échantillons allant jusqu'à 1×101 UFC/g de cellules vivantes. La méthode RFLP multienzymatique (MeRFLP) a montré que la taille des fragments d'ADN obtenus correspondait à la taille théorique des fragments, ce qui suggère que la transcription inverse-MeRFLP (RT-MeRFLP) pourrait identifier les bactéries cibles. Ces résultats suggèrent que la RT-MeRFLP, qui ne nécessite pas de culture et peut être réalisée en 6,5 heures, est une approche prometteuse pour un système peu coûteux, rapide et fiable d'identification des bactéries dans les aliments.