Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Comparaison entre deux constructions de L-Asparaginase II d'Erwinia carotovora : clonage, expression hétérologue, purification et caractérisation cinétique

Priscila Lamb Wink, Heique Marlis Bogdawa, Gaby Renard, Jocelei Maria Chies, Luiz Augusto Basso et Diógenes Santiago Santos

Français La L-asparaginase II d' Erwinia carotovora peut représenter une thérapie alternative importante dans le traitement de la leucémie lymphoblastique aiguë de l'enfant, malgré son activité glutaminase prometteuse inférieure à celle des L-asparaginases II d'Escherichia coli et d'Erwinia chrysanthemi , actuellement utilisées dans le traitement de cette maladie. Nous décrivons ici le clonage, l'expression, la purification et la détermination des paramètres cinétiques à l'état d'équilibre de la L-asparaginase II d'E. carotovora : avec (AspSP) et sans le peptide signal (AspMP). L'AspMP a été purifiée jusqu'à homogénéité par un protocole en une seule étape avec un rendement de 91 %, et l'AspSP par un protocole en deux étapes avec un rendement de 28 %. De plus, les deux enzymes ont présenté des activités spécifiques élevées similaires : 208,1 et 237,6 U mg ^-1 , respectivement. Les valeurs de Km et k _cat ont montré que l'AspMP a une activité glutaminase inférieure à celle de l'AspSP. De plus, l'AspMP est produite par un protocole de purification plus simple et avec un rendement plus élevé. Ce procédé peut être adapté à une production à grande échelle et intéresser les chercheurs et les sociétés biopharmaceutiques.