Génétique héréditaire : recherche actuelle

Abstrait

Comparaison du dénombrement des cellules CD34+ et CD45+ par trois méthodes de fluorescence différentes

Tzonka Godjevargova

Résumé
Lanumération des cellules souches et des leucocytes dans les échantillons de sang périphérique et d'aphérèse a été réalisée en utilisant l'expression de biomarqueurs des protéines CD34+ et CD45+ à leur surface cellulaire. Le but de cette étude était le comptage simultané des cellules souches vivantes et des leucocytes dans les échantillons d'aphérèse en utilisant deux conjugués fluorescents différents. Le conjugué entre l'anticorps monoclonal anti-CD34 et le colorant fluorescent DR110 a coloré les cellules souches en vert. Le conjugué entre l'anticorps monoclonal anti-CD45 et le colorant fluorescent ATTO620 a coloré les leucocytes en rouge. Les conjugués anticorps anti-CD34 - DR110 et anticorps anti-CD45 - ATTO620 ont été préparés par la méthode du carbodiimide et purifiés par filtration sur gel. Le comptage a été effectué en utilisant un nouveau microscope à fluorescence automatique EasyCounter BC. Les cellules mortes ont été comptées par le colorant cyanine monométhyne - Sofia Green. Les analyses de six échantillons d'aphérèse ont été effectuées. Les résultats obtenus avec EasyCounter BC ont été comparés aux résultats obtenus avec deux autres méthodes standard – cytométrie de flux (Guava easyCyte 8HT) et méthode de microscopie à fluorescence (Olympus BX51). Les numérations cellulaires obtenues avec EasyCounter BC et le cytomètre de flux étaient très similaires. Les coefficients de variation des résultats obtenus avec EasyCounter BC (3-6 %) étaient inférieurs à ceux obtenus avec le cytomètre de flux (5-8 %) et avec le microscope Olympus (14-18 %).