Journal of Biomolecular Research & Therapeutics

Abstrait

Acylation complexe de l'angiotensine II par des réactifs de biotine liés à la N-hydroxysulfosuccinimide

Qinfeng Liu, Andres Lam et Achyut Kathuria

Les biotines liées à la N-hydroxysulfosuccinimide (sulfoNHS-biotines) sont des marqueurs de biotine hydrosolubles couramment utilisés pour conjuguer une fraction de biotine à des protéines par N-acylation rapide d'amines primaires. Une O-acylation inattendue par la sulfoNHSbiotine sur la tyrosine de l'angiotensine II (Ag-II) et une acylation sur un troisième site impossible à caractériser ont été identifiées par LC-MS en plus de la N-acylation attendue sur le N-terminal de l'Ag-II. La N-acylation ne subit qu'une hydrolyse incomplète dans l'acide formique à 0,1 % et non à pH 7,2 et 8,0, tandis que deux acylations inattendues s'hydrolysent dans les deux conditions, mais leur hydrolyse dans l'acide formique à 0,1 % était beaucoup plus rapide. Le traitement au dithiothréitol a catalysé sélectivement l'hydrolyse des deux acylations inattendues mais pas la N-acylation de l'Ag-II. Français Le rendement maximum d'O-acylation de la tyrosine Ag-II était de 99 % à pH 7,2 et de 95 % à pH 8,0 par rapport à la N-acylation de la lysine lorsqu'elle réagissait avec un excès de sulfoNHS-biotine avec ces rendements de 94 % à pH 7,2 et de 96 % à pH 8,0. L'acylation du troisième site non caractérisé d'Ag-II a montré un rendement maximum d'environ 17 % à pH 7,2, mais un rendement plus élevé (≥ 47 %) à pH 8,0 en 30 min. L'O-acylation inattendue de la tyrosine Ag-II s'est produite en 1 min à pH 7,2 ou pH 8,0, aussi rapidement que la N-acylation, tandis que l'autre acylation inattendue a nécessité plus de temps pour se terminer à pH 8,0.