Journal des troubles sanguins et de la transfusion

Abstrait

Cryoconservation et dénombrement des cellules endothéliales progénitrices et endothéliales humaines pour les essais cliniques

Bogoslovsky T, Wang D, Maric D, Scattergood-Keepper L, Spatz M, Auh S et Hallenbeck J

Contexte : Les cellules progénitrices endothéliales (EPC) sont des marqueurs de lésion endothéliale et peuvent servir de marqueur de substitution pour la réparation vasculaire dans les essais cliniques interventionnels. Les objectifs de cette étude étaient de modifier une méthode d'isolement des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) et de dénombrement des EPC et des cellules endothéliales matures (EC) du sang périphérique et d'évaluer l'influence de la cryoconservation sur la viabilité des PBMC et sur le nombre d'EPC et d'EC. Patients/Méthodes : Les EPC et les EC ont été analysés chez des volontaires sains dans des PBMC fraîchement isolées collectées dans des tubes de préparation cellulaire (CPT) et dans des PBMC cryoconservées avec : 1) Gibco RecoveryTM Cell Culture Freezing Medium, 2) un milieu de congélation personnalisé. La viabilité des PBMC a été testée à l'aide de DAPI. Français Les EPC ont été sélectionnés pour CD45-CD34+CD133+/-VEGFR2+/- et les EC ont été sélectionnés pour CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/-. Résultats : La cryoconservation pendant 7 jours à -80 °C a diminué les PBMC viables de 94 ± 0,5 % (frais) à 84 ± 4 % (milieu personnalisé) et à 69 ± 8 % (milieu Gibco), tandis que la cryoconservation à -65 °C a diminué la viabilité à 60 ± 6 % (p < 0,001, milieu personnalisé) et 49 ± 5 % (p < 0,001, milieu Gibco). Français Dans les échantillons frais, les EPC précoces (CD45-CD34+CD133+VEGFR2+) ont été dénombrés à 0,2 ± 0,06 %, les EPC tardifs (CD45-CD146+CD34+VEGFR2+) à 0,6 ± 0,1 % et les EC matures (CD45-CD146+CD34-VEGFR2+) à 0,8 ± 0,3 % des PBMC vivants. La cryoconservation avec Gibco et le milieu de congélation personnalisé à -80 ºC pendant 7 jours a diminué le nombre d'EPC et d'EC, cependant, cette diminution n'était pas statistiquement significative. Conclusions : Nos données indiquent que la cryoconservation à -80 °C pendant 7 jours diminue, bien que de manière non significative, la viabilité des PBMC et le nombre de sous-ensembles d'EC et d'EPC. Cette méthode peut fournir une approche optimisée pour l’isolement et la cryoconservation à court terme de sous-ensembles d’EPC et d’EC matures adaptés aux essais multicentriques.