Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrait

CTP : l'ARNsi de la phosphocholine cytidyltransférase alpha (CCTα) induit la mort cellulaire des cellules cancéreuses du poumon

Rukia Marijani et Barack O. Abonyo

CTP : La choline cytidylyltransférase (CCT) est une enzyme limitant la vitesse de synthèse de la phosphatidylcholine (PC) par la voie CDP-choline, qui est essentielle à la prolifération cellulaire. Les cellules dépourvues conditionnellement d'activité CCT? meurent par apoptose. L'inhibition de l'expression ou de l'activité de CCT? dans les cellules cancéreuses à l'aide des techniques moléculaires actuelles fournirait un excellent mécanisme non toxique pour tuer les cellules cancéreuses. Le but de cette étude était d'examiner la possibilité d'utiliser les séquences d'ARNsi CCT? comme agents anticancéreux en étudiant leur capacité à induire la mort des cellules cancéreuses du poumon. Des lignées de cellules épithéliales pulmonaires p53 positives, A549 et négatives, H1299 ont été transfectées avec diverses concentrations (0-800 nM) de séquences d'ARNsi CCT? (A, B et C) et d'ARNsi à séquence brouillée (ARNsi S) comme contrôle pendant 24 heures. L'inhibition de l'expression de CCT? par divers ARNsi a été déterminée par analyse Western blot. Français Le microscope Olympus a été utilisé pour observer l'impact de la suppression de CCT? sur la structure et la morphologie cellulaire tandis que le rôle de l'ARNsi CCT? dans la toxicité et la survie cellulaires a été analysé par des tests de titre cellulaire bleu (CTB) et de lactose déshydrogénase (LDH). Toutes les séquences d'ARNsi CCT? ont inhibé de manière significative l'expression de la protéine CCT?. Les images capturées par le microscope ont montré que les cellules non traitées et traitées par l'ARNsi S étaient intactes et avaient des noyaux visibles tandis que les cellules transfectées par l'ARNsi CCT? étaient rétrécies avec des noyaux contenant des structures granulaires sombres similaires aux corps apoptotiques. À des concentrations plus élevées d'ARNsi CCT?, les membranes cellulaires étaient complètement dégradées montrant des signes de lyse cellulaire. Le test CTB a révélé que les cellules non traitées présentaient une intensité de fluorescence élevée indiquant la présence de cellules plus viables, qui diminuait à mesure que la concentration d'ARNsi CCT? augmentait. Le test LDH a montré que les cellules transfectées par l'ARNsi CCT? présentaient des absorbances plus élevées que les cellules non traitées reflétant les cellules mortes. Les deux tests ont montré que les cellules traitées par siRNA S présentaient des résultats similaires à ceux des cellules non traitées, ce qui suggère que la mort cellulaire était spécifique de l'inhibition de CCTasiRNA. De plus, l'ajout de PC n'a pas amélioré la viabilité des cellules traitées par CCT?-siRNA. Ces résultats démontrent que les siRNA CCT? ont inhibé la protéine CCT?, entraînant la mort cellulaire, ce qui implique que les séquences pourraient être utiles comme agents anticancéreux.