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Abstrait

Détection de cellules endothéliales inflammatoires circulantes à l'aide de cellules endothéliales de veine ombilicale humaine détachées de boîtes de culture par le facteur de nécrose tumorale alpha comme cellules témoins

Junpei Tochikubo, Naoyuki Matsuda, Yoshimi Ota, Tomoko Higashi, Yudai Takatani, Masato Inaba, Yushi Adachi et Norihiko Shiiya

Contexte : Le syndrome de réponse inflammatoire systématique (SIRS) avec coagulation intravasculaire disséminée (CIVD) est un trouble grave chez les patients gravement malades et étroitement lié à la progression des lésions endothéliales vasculaires. Un diagnostic précoce est nécessaire pour prévenir la progression du dysfonctionnement organique. Les cellules endothéliales circulantes (CEC) pourraient augmenter en cas de lésion endothéliale vasculaire et jouer un rôle important dans le diagnostic de CIVD. Cependant, la méthode de détection des CEC n'a pas été standardisée. Cette étude visait à établir une méthode de détection des CEC dans un contexte de soins intensifs. Nous avons utilisé des cellules endothéliales de veine ombilicale humaine (HUVEC) détachées des boîtes de culture par le facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-α) comme cellules témoins pour les CEC.
Méthodes : Les HUVEC cultivées ont été incubées dans un milieu avec du TNF-α (100 ng/mL), et les cellules détachées des boîtes de culture après 24 h ont été utilisées comme TNF-HUVEC. Les molécules de surface cellulaire des HUVEC normales, des TNF-HUVEC et des cellules sanguines ont été analysées à l'aide de la cytométrie de flux (FC) pour rechercher des marqueurs appropriés pour la détection des CEC. Les HUVEC normales et les TNF-HUVEC ont été ajoutées au sang et détectées à l'aide de la FC et de la méthode immunobead (IB) pour comparer les deux méthodes. Les CEC ont été mesurées chez des volontaires sains et des patients de l'unité de soins intensifs (USI) à l'aide de la FC.
Résultats : CD146 et CD105 étaient fortement exprimés dans les HUVEC et supérieurs pour la séparation des UVEC des cellules sanguines totales. Les taux moyens de détection des HUVEC normales étaient de 75 % en FC et de 82 % en IB. Cependant, les taux moyens de détection des TNF-HUVEC étaient de 64 % en FC et de 27 % en IB (p < 0,05). Le nombre moyen de CEC de 20 volontaires sains et de 16 patients de l'unité de soins intensifs était respectivement de 2,8 cellules/ml et de 4,3 cellules/ml. Chez un patient en USI souffrant d'une CIVD induite par un SIRS, les CEC ont augmenté de 49 cellules/ml.
Conclusion : CD146 et CD105 sont adaptés à la détection des cellules endothéliales dans le sang. FC est supérieur à IB pour détecter les cellules endothéliales dans les états inflammatoires sévères.