Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrait

Développement d'un test rapide et rentable pour le dépistage de l'inhibition réversible du cytochrome P450 en parallèle avec l'inhibition dépendante du métabolisme du Cyp3a4 à l'aide de protéines recombinantes

Serenella Zambon, Stefano Fontana, Raffaele Longhi et Mahmud Kajbaf

Dans la présente étude, nous avons développé un test d'inhibition du CYP450 de haute qualité, rapide et rentable, capable de détecter à la fois l'inhibition réversible et l'inhibition dépendante du métabolisme du CYP3A4 (MDI), en utilisant des isoformes P450 exprimées de manière recombinante et des substrats P450 fluorogéniques. L'isoforme CYP3A4 est criblée avec de la diéthoxyfluoréscéine (DEF) comme substrat de sonde. Les valeurs de CI50 peuvent ensuite être calculées pour les composés d'essai par rapport à l'isoforme CYP3A4, en fonction du taux de métabolisme du substrat de sonde, mesuré pendant 10 minutes. De plus, le potentiel inhibiteur dépendant du métabolisme du CYP3A4 des composés d'essai est déterminé en prolongeant pendant 30 minutes la détermination du taux de métabolisme de la diéthoxyfluoréscéine et en calculant les valeurs de CI50 toutes les 5 minutes de la période d'incubation. Une estimation du potentiel inhibiteur dépendant du métabolisme du CYP3A4 des composés d'essai peut être déterminée en comparant les valeurs de CI50, mesurées après 10 et 30 minutes d'incubation. L'incubation a été réalisée en utilisant les inhibiteurs sélectifs du CYP, le miconazole, pour l'inhibition directe du P450, et la troléandromycine, pour l'inhibition dépendante du métabolisme, comme témoins positifs. L'ensemble du processus de criblage a été entièrement automatisé dans un format de plaque à 96 puits avec l'utilisation de la technologie robotisée de manipulation de liquides Hamilton couplée à deux fluorimètres (Tecan) et à une gestion personnalisée des informations de laboratoire. Ce test est actuellement appliqué pour cribler les composés au début du processus d'optimisation des pistes et identifier les composés qui provoquent une inhibition réversible et/ou basée sur le métabolisme du CYP450 et donc faire progresser les molécules ou séries chimiques avec le potentiel DDI le plus faible possible. Le grand nombre de données générées par ce test peut également être utilisé pour créer une base de données informative et améliorer les modèles prédictifs.