Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Dgcr8 est indispensable à la spécification de la lignée cardiaque dans les cellules souches embryonnaires

Zhiyong Lei, Alain van Mil, Annebel M van de Vrugt, Pieter A Doevendans et Joost PG Sluijter

Objectif : Il a été démontré que les microARN jouent un rôle important dans le comportement cellulaire et la spécification de la lignée, y compris la différenciation cardiogénique. Cependant, la compréhension complète de leur rôle dans la différenciation des cardiomyocytes a été entravée en raison du manque de modèle cellulaire approprié. Ici, nous avons utilisé une cellule souche embryonnaire (ESC) dépourvue du microprocesseur important Dgcr8 (ou Pasha), qui permet l'introduction de miARN individuels pour étudier leur rôle dans la différenciation cardiaque et pour une sélection plus précise des cibles.
Méthodes : Les cellules souches embryonnaires KO Dgcr8 ont été cultivées dans un milieu ESC supplémenté en LIF avec des fibroblastes embryonnaires de souris et la différenciation cardiaque a été induite à l'aide d'un protocole de différenciation basé sur le corps embryonnaire. La différenciation a été surveillée en mesurant les niveaux d'ARNm et de protéines des marqueurs cardiogéniques et les changements d'hétérochromatine à l'aide d'une coloration immunofluorescente et d'une PCR semi-quantitative.
Résultats et conclusion : Nous avons montré que les cellules souches embryonnaires KO Dgcr8 manquent en effet d'une grande population de petits ARN, y compris, mais sans s'y limiter, des microARN matures. Les cellules KO présentaient un taux de prolifération plus faible et étaient incapables de se différencier en lignée cardiaque. À notre grande surprise, en plus d’un défaut de traitement des microARN, les cellules souches embryonnaires KO Dgcr8 sont incapables de former une hétérochromatine appropriée et d’inactiver les éléments répétitifs centromériques génotoxiques. Nos résultats suggèrent qu’en plus de contrôler le traitement des microARN, Dgcr8 pourrait jouer un rôle jusqu’alors inconnu dans le silençage de l’hétérochromatine.