Budd A Tucker, Frances Solivan-Timpe, Ben R Roos, Kristin R Anfinson, Alan L Robin, Luke A Wiley, Robert F Mullins et John H Fingert
La duplication du gène TBK1 provoque un glaucome à tension normale (NTG) ; cependant, le mécanisme par lequel cette variation du nombre de copies conduit à la mort des cellules ganglionnaires de la rétine est mal compris. La capacité d'utiliser des cellules souches pluripotentes induites dérivées de la peau (iPSC) pour étudier la fonction ou le dysfonctionnement d'un produit génique mutant dans des tissus inaccessibles tels que la rétine nous donne désormais la possibilité d'interroger la physiopathologie de la maladie in vitro. Les iPSC ont été générées à partir de fibroblastes dermiques obtenus d'un patient atteint de NTG associé à TBK1, via la transduction virale des facteurs de transcription OCT4, SOX2, KLF4 et c-MYC. Les cellules progénitrices rétiniennes et les neurones ultérieurs de type cellules ganglionnaires rétiniennes ont été dérivés à l'aide de notre protocole de différenciation par étapes précédemment développé. La différenciation en cellules de type ganglionnaire rétinienne a été démontrée par rt-PCR ciblant TUJ1, MAP2, THY1, NF200 et ATOH7 et par immunohistochimie ciblant NF200 et ATOH7. L'analyse Western blot a démontré que les fibroblastes et les neurones de type cellules ganglionnaires rétiniennes dérivés de patients NTG avec duplication du gène TBK1 ont des niveaux accrus de protéine LC3-II (un marqueur clé de l'autophagie). Il a été précédemment démontré que la duplication de TBK1 augmente l'expression de TBK1 et nous démontrons ici que la même duplication conduit à l'activation de LC3-II. Cela suggère que le glaucome associé à TBK1 peut être causé par une dysrégulation (suractivation) de cette voie catabolique.