Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Oxydase de L-aminoacide d'Aspergillus fumigatus - Purification et caractérisation en deux étapes de l'enzyme

Susmita Singh, Binod Kumar Gogoi et Rajib Lochan Bezbaruah

L'oxydase d'acides aminés L-aao (L-aao) obtenue à partir d'Aspergillus fumigatus a été purifiée par chromatographie d'échange d'ions et par filtration sur gel. Le rendement de L-aao dans la chromatographie d'échange d'ions était de 24,40 % tandis que la récupération de L-aao purifiée par filtration sur gel était de 18,70 % de l'enzyme brute. La masse moléculaire de l'enzyme purifiée a été estimée à 55 kDa par SDS PAGE et à 93 kDa par filtration sur gel. L'enzyme était stable jusqu'à 40 ºC et sur une large plage de pH de 5,6 à 9,2. L'enzyme a une spécificité plus élevée envers les acides aminés L aromatiques hydrophobes, à savoir la tyrosine et la phénylalanine. Les paramètres cinétiques, Km et Vmax ont été déterminés à 43,47 mM et 0,0434 μmol/min/mL respectivement. L'acide benzoïque 10 mM et l'EDTA ont complètement inhibé l'enzyme, tandis qu'une inhibition minimale avec la glycine (29,56 %) et l'α-naphtol (12,4 %) a été observée. La riboflavine, l'azoture de sodium et la 8-hydroxyquinoléine inhibent l'enzyme jusqu'à 44,89 %, 49,63 % et 70,07 % respectivement. Le MgSO4 à 10-4 M et 10-3 M a augmenté l'activité enzymatique de 1,72 et 2,22 fois respectivement, tandis que le CuSO4 à 10-3 M a augmenté l'activité de 1,65 fois. Il s'agit du premier rapport sur la purification de L-aao à partir d'Aspergillus fumigatus.