Shardul Salunkhe, Bhaskarjyoti Prasad, Ketaki Sabnis-Prasad, Anjali Apte-Deshpande et Sriram Padmanabhan
L'invention concerne un procédé de repliement et de purification améliorés de l'interféron humain dérivé d'E. coli -? (rhIFN ?2b) à partir de corps d'inclusion en tant que protéine de fusion de staphylokinase (SAK). Une telle protéine de fusion ne nécessite pas la supplémentation de codons rares pour l'expression et s'est avérée stable à 37 ?C. Les conditions optimales de repliement impliquent l'utilisation d'un agent dénaturant doux sans avoir besoin d'autres agents pour empêcher l'agrégation. La protéine de fusion SAKrhIFN ?2b a été purifiée avec succès en utilisant deux étapes de purification et a été clivée en utilisant l'entérokinase en deux fragments, à savoir SAK et IFN. Les deux protéines se sont avérées biologiquement actives montrant un repliement correct des deux partenaires de fusion. L'IFN clivé a montré un temps de rétention similaire sur RP-HPLC à celui de l'IFN purifié non marqué dérivé de bactéries ainsi qu'un poids moléculaire similaire sur le bioanalyseur Agilent 2100 indiquant le traitement correct de l'IFN après le clivage de l'entérokinase. Les niveaux d’expression de SAK-IFN se sont avérés deux fois plus élevés que ceux observés avec l’IFN non marqué dans des conditions expérimentales similaires.