Biologie unicellulaire

Abstrait

Expression génétique dans des cellules individuelles isolées de la lignée cellulaire du cancer de la prostate CWR-R1 et du tissu prostatique humain en fonction du phénotype de la population secondaire

Kalyan J Gangavarapu, Austin Miller et Wendy J Huss

La définition des signaux biologiques au niveau de la cellule unique peut permettre d'identifier les mutations motrices initiatrices du cancer. Les techniques d'isolement de cellules individuelles telles que le tri microfluidique et les systèmes de capture magnétique présentent des limites telles que : un coût élevé, une main-d'œuvre intense et la nécessité d'un grand nombre de cellules. Par conséquent, l'objectif de notre étude actuelle est d'identifier une technique rentable et efficace, fiable et reproductible qui permette l'isolement de cellules individuelles pour l'analyse afin de promouvoir une utilisation régulière en laboratoire, y compris la PCR à transcription inverse standard (RT-PCR).

Dans l'étude actuelle, nous avons utilisé des cellules prostatiques isolées de la lignée cellulaire du cancer de la prostate CWR-R1 et des échantillons cliniques de prostate humaine, sur la base du test d'efflux du transporteur de cassette de liaison à l'ATP (ABC) du colorant violet (DCV), population latérale. L'expression de quatre gènes : ABCG2 ; Aldéhyde déshydrogénase 1A1 (ALDH1A1) ; récepteur des androgènes (AR) ; et marqueur des cellules souches embryonnaires, Oct-4, a été déterminée.

Les résultats de l'étude actuelle sur la lignée cellulaire CWR-R1 ont montré que les gènes ABCG2 et ALDH1A1 s'exprimaient dans 67 % des cellules de la population unilatérale et dans 17 % ou 100 % des cellules de la population non latérale respectivement. Des études utilisant des cellules individuelles isolées à partir d'échantillons cliniques ont montré que le gène Oct-4 n'est détecté que dans 22 % des cellules de la population unilatérale et dans 78 % des cellules de la population non latérale uniques. En revanche, l'expression du gène AR est présente dans 100 % des cellules de la population unilatérale et non latérale isolées à partir du même échantillon clinique de prostate humaine.

Ces études montrent que la RT-PCR sur des cellules individuelles isolées par FACS peut être réalisée avec succès pour déterminer l'expression génétique dans des cellules individuelles issues de lignées cellulaires et de tissus digérés par voie enzymatique. Bien que ces études fournissent une lecture simple de l'expression par oui/non, la RT-PCR quantitative plus sensible pourrait fournir encore plus d'informations si nécessaire.