Journal de bioéquivalence et de biodisponibilité

Abstrait

Quantification de l'hydroxocobalamine dans le plasma humain par chromatographie liquide haute performance couplée à la spectrométrie de masse en tandem par électrospray dans une étude pharmacocinétique

Gustavo D. Mendes, Fabiana D. Mendes, Marinalva Ferreira Sampaio, Antonio Sergio Silveira, Lu Shi Chen, Khalid M. Alkharfy et Gilberto De Nucci

L'invention concerne une méthode rapide, sensible et spécifique de quantification de l'hydroxocobalamine dans le plasma humain en utilisant le paracétamol comme étalon interne (EI). L'analyte et l'EI ont été extraits du plasma par extraction liquide-liquide à l'aide d'un solvant organique (éthanol 100 % ; -20 °C). Les extraits ont été analysés par chromatographie liquide haute performance couplée à une spectrométrie de masse en tandem par électrospray (HPLC-MS-MS). La chromatographie a été réalisée sur une colonne analytique Prevail C8 3 μm (2,1 × 100 mm de diamètre intérieur). La méthode avait une durée d'exécution chromatographique de 3,4 min et une courbe d'étalonnage linéaire sur la plage de 5 à 400 ng.mL-1 (r> 0,9983). La limite de quantification était de 5 ng.mL-1. La méthode a également été validée sans l'utilisation de l'étalon interne. Français La précision de la validation intra-lot avec IS était de 9,6 %, 8,9 %, 1,0 % et 2,8 %, tandis que sans IS elle était de 9,2 %, 8,2 %, 1,8 % et 1,5 % pour 5, 15, 80 et 320 ng/mL, respectivement. La précision de la validation intra-lot avec IS était de 108,9 %, 99,9 %, 98,9 % et 99,0 %, tandis que sans IS elle était de 101,1 %, 99,3 %, 97,5 % et 92,5 % pour 5, 15, 80 et 320 ng/mL, respectivement. Français La précision de la validation inter-lots avec IS était de 9,4 %, 6,9 %, 4,6 % et 5,5 %, tandis que sans IS elle était de 10,9 %, 6,4 %, 5,0 % et 6,2 % pour 5, 15, 80 et 320 ng/mL, respectivement. La précision de la validation inter-lots avec IS était de 101,9 %, 104,1 %, 103,2 % et 99,7 %, tandis que sans IS elle était de 94,4 %, 101,2 %, 101,6 % et 96,0 % pour 5, 15, 80 et 320 ng/mL, respectivement. Cette procédure HPLC-MS-MS a été utilisée pour évaluer la pharmacocinétique de l'hydroxo-cobalamine après injection intramusculaire de 5 000 μg chez des volontaires sains des deux sexes (10 hommes et 10 femmes). Français Les volontaires avaient les caractéristiques cliniques suivantes (selon le sexe et exprimées en moyenne ± ET [fourchette]) : hommes : âge : 32,40 ± 8,00 ans [23,00-46,00], taille : 1,73 ± 0,07 m [1,62-1,85], poids corporel : 72,48 ± 10,22 kg [60,20- 88,00] ; femmes : âge : 28,60 ± 9,54 ans [18,00-44,00], taille : 1,60 ± 0,05 m [1,54-1,70], poids corporel : 58,64 ± 6,09 kg [51,70- 66,70]. Les paramètres pharmacocinétiques suivants ont été obtenus à partir des courbes de concentration plasmatique d'hydroxocobalamine en fonction du temps : AUClast, T1/2, Tmax, Vd, Cl, Cmax et Clast. Les paramètres pharmacocinétiques étaient de 120 (± 25) ng/mL pour Cmax, 2044 (± 641) ng.h/mL pour AUClast, 8 (± 3,2) ng.mL-1 pour Clast, 38 (± 15,8) h pour T1/2 et 2,5 (plage 1-6) h pour Tmax. Les volontaires de sexe féminin ont présenté une ASC significativement plus faible (p = 0,0136) (1706 ± 704) ng.h/mL) et une clairance plus importante (p = 0,0205) (2,91 ± 1,41 L/h), par rapport aux hommes (2383 ± 343 ng.h/mL et 1,76 ± 0,23 L/h, respectivement). Ces différences pharmacocinétiques pourraient expliquer la prévalence plus élevée de la carence en vitamine B12 chez les patientes . La méthode décrite a été bien validée sans l'utilisation de l'étalon interne et cette approche devrait être étudiée dans d'autres méthodes HPLC-MS-MS.