Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Identification et caractérisation de molécules ayant des activités antimicrobiennes issues d'épididyme de lapin à l'aide d'une approche protéomique

Reddy KVR, Sukanya Deva, Clara Aranha, Mandar S. Patgaonkar et Gauri Bhonde

Les peptides antimicrobiens (PAM) sont les composants clés du système immunitaire inné de l'hôte et constituent la première ligne de défense de l'hôte contre les agents pathogènes envahissants. Dans la présente étude, des tentatives ont été faites pour identifier et caractériser les PAM synthétisés dans les cellules épithéliales épididymaires (EPEC) du lapin, Oryctologus cuniculus. L'induction ex vivo des EPEC avec le ligand TLR-9, CpG-ODN-2006, a entraîné une régulation positive de plusieurs PAM. Ces molécules ont été identifiées dans les extraits acides d'homogénats de tissus épididymaires groupés en utilisant une approche protéomique (ultrafiltration, chromatographie d'échange de cations, RP-HPLC, Far Western blotting - FWB, 2D-PAGE et MALDI-TOF-MS). La fraction RP-HPLC groupée (pics 1 à 5), appelée protéine antimicrobienne sécrétoire épididymaire de lapin (RESAMP), a montré une activité contre plusieurs agents pathogènes. Les résultats de la FWB, de la 2D-PAGE et de la MALDI-TOF-MS ont révélé que sur les ~19 protéines identifiées, quatre séquences protéiques (sous-unités d'hémoglobine-α/β, transthyrétine et calréticuline) réagissaient avec les antigènes du VIH (gp120, gp17, gp41, p24). L'une des quatre séquences (VLSHHFGKEFTPQVQ) présentait une homologie de >90 % avec la protéine hémoglobine-β. Un peptide de 29 mers avec la séquence VLSHHFGKEFTPQVQ a été désigné comme hémoglobine bêta épididymaire de lapin (REHbβP). Français Le peptide synthétisé a montré le score Mowse basé sur la probabilité (PBMS) le plus élevé et a démontré une bonne activité bactéricide (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes et Candida albicans. REHbβP n'a pas montré de cytotoxicité contre les cellules endocervicales humaines (End1/E6E7) et les érythrocytes de lapin. Les résultats d'immunofluorescence ont révélé que REHbβP était localisé dans les stéréocils de l'épididyme et sur l'acrosome des spermatozoïdes éjaculés de lapin. À notre connaissance, il s'agit de la première étude décrivant la détection d'AMP dans l'épididyme de lapin. En conclusion, la présente étude suggère que les EPEC dérivés de REHbβP pourraient avoir un potentiel thérapeutique dans la gestion du bien-être reproductif des humains et des animaux.