Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Méthode améliorée d'isolement de cardiomyocytes de rats néonatals avec un rendement accru de cellules progénitrices cardiaques C-Kit+

Jennifer Rutering, Matthias Ilmer, Alejandro Recio, Michael Coleman, Jody Vykoukal et Eckhard Alt

La thérapie cellulaire représente un nouveau paradigme prometteur pour le traitement des maladies cardiaques, une cause majeure de mortalité dans le monde industrialisé. La découverte récente de cellules progénitrices cardiaques (CPC) c-Kit+ résidentes dans les tissus a alimenté les efforts scientifiques pour exploiter ces cellules à des fins thérapeutiques pour des interventions régénératrices, et la culture primaire de cardiomyocytes est un modèle in vitro courant pour étudier les mécanismes moléculaires de base sous-jacents à la dégénérescence et à la régénération cardiaques. Les protocoles actuels d'isolement des cardiomyocytes entraînent souvent un faible rendement cellulaire et une déplétion insuffisante des fibroblastes, qui envahissent ensuite les cardiomyocytes en culture. Dans ce protocole, nous décrivons une méthode améliorée d'isolement des cardiomyocytes de rats nouveau-nés qui permet également d'améliorer les rendements en CPC. Des techniques douces de traitement enzymatique et mécanique des tissus garantissent un nombre élevé de cellules et une viabilité élevée, tandis que la centrifugation ultérieure en gradient de densité Percoll minimise les fibroblastes. Nous avons comparé les avantages de différentes enzymes et avons découvert que la collagénase 2 seule conduit à des rendements très élevés de cardiomyocytes, tandis que l'application du mélange d'enzymes Matrase™ augmente le rendement relatif de CPC c-Kit+ jusqu'à 35 %. Les cardiomyocytes et les CPC isolés avec ce protocole peuvent constituer une source cellulaire importante pour l'étude des maladies cardiaques ainsi que des approches thérapeutiques basées sur les cellules.