Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Isolement, purification partielle et caractérisation de la L-asparaginase à partir du sérum de Hedgehog

Ekpa Emmanuel, Nzelibe HC et Onyike E

La nécessité d'explorer d'autres sources de thérapie pour les leucémies a motivé ces travaux actuels. On sait déjà que la L-asparaginase possède un grand potentiel dans le traitement des cancers des globules blancs, mais les sources de cette enzyme et ses propriétés déterminent l'efficacité de ce médicament. En général, pour que l'asparaginase soit idéalement adaptée à une utilisation dans une thérapie antitumorale, elle doit satisfaire à une variété de critères. L'organisme sélectionné doit produire l'asparaginase en grande quantité ou en rendement, et elle doit pouvoir être isolée à partir de sources mammifères simples. Les procédures développées pour la purification de l'enzyme doivent être aussi rapides et simplifiées que possible. L'enzyme purifiée doit avoir une stabilité à long terme lors du stockage, une activité maximale à un pH physiologique et un Km pour le substrat inférieur à la concentration du substrat dans le sang. Par conséquent, l'objectif de cette recherche actuelle était de purifier et de caractériser partiellement cette enzyme à partir du sérum Hedgehog afin de comparer ses potentiels antileucémiques avec ceux de la littérature documentée pour une éventuelle application médicale future. La L-asparaginase a été isolée et partiellement purifiée à partir du sérum Hedgehog, qui est également connu pour être un réservoir de nombreuses autres protéines utiles, notamment des antivenins, en utilisant un profil en quatre étapes de fractionnement au sulfate d'ammonium, de dialyse et de chromatographie par échange d'ions et filtration sur gel. L'enzyme a donné un rendement global de 77,58 %, un pH et une température optimaux de 7,8 et 39 ºC respectivement, et un Km de 0,0125 mM. La filtration sur gel a donné un poids moléculaire approximatif de 139 000 Da, tandis que la SDS PAGE a indiqué un poids moléculaire sous-unitaire de 36 000 et 34 600 Da respectivement. L'enzyme catalyse également l'hydrolyse de la glutamine, bien que légèrement. Mg2+ et Zn2+ servent d'activateurs pour la L-asparaginase du sérum Hedgehog, tandis qu'une inhibition par des ions lourds comme Hg2+ a également été observée. Ces travaux montrent que les sources mammifères de cette enzyme pourraient être plus préférables pour le traitement des tumeurs dépendantes de l’asparagine dans les temps à venir.