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Abstrait
Méthode colorimétrique à débit moyen/élevé pour la détermination des acides aminés D. Application aux racémases d'acides aminés
Armand Berneman, Marcelo Alves-Ferreira, Nicolas Coatnoan, Nathalie Chamond et Paola Minoprio
La détection et la quantification des acides aminés libres dans les échantillons nécessitent toujours des technologies élaborées, puissantes et généralement coûteuses et parfois chronophages telles que la chromatographie gazeuse, la HPLC ou des techniques de commutation de colonnes hautement sélectives et sensibles. Ici, nous avons entrepris de développer une méthode simple, en une seule étape, sur plaque de microtitration pour détecter et/ou quantifier la plupart des acides aminés D dans des solutions basées sur l'enzyme D-amino acide oxydase et la génération de quantités stoechiométriques de peroxyde d'hydrogène. L'inclusion de la peroxydase de raifort et de l'OPD permet la détermination de la concentration en acides aminés D par l'absorbance des produits de réaction par rapport à des dilutions en série de quantités équimolaires d'étalons d'acides aminés L/D. La méthodologie est facilement adaptable pour une analyse à débit moyen/élevé des activités racémases d'acides aminés.