Journal de génie chimique avancé

Abstrait

Réacteur microfluidique pour le fonctionnement séquentiel de la réaction de détection de la réaction en chaîne par polymérase/ligase

Masahiko Hashimoto, Kazuhiko Tsukagoshi et Steven A. Soper

Nous avons développé un bioréacteur microfluidique pour détecter des mutations de base unique dans l'ADN génomique, où une réaction en chaîne par polymérase (PCR) primaire et une réaction de détection de ligature allèle-spécifique (LDR) ont été réalisées en séquence. L'effet du report de la PCR primaire sur la LDR ultérieure a été étudié en profondeur en termes de rendement et de fidélité de la LDR, et nous avons constaté qu'un traitement post-PCR pour les amplicons avant son incorporation dans la phase LDR n'était pas nécessairement nécessaire, ce qui nous a permis d'utiliser un simple mélangeur diffusif pour mélanger en ligne la solution post-PCR avec les réactifs LDR. Nous avons également effectué une analyse numérique pour estimer approximativement la longueur de canal requise pour le mélange diffusif. Nous avons démontré avec succès la capacité du système à détecter un ADN mutant dans 1000 séquences normales à une vitesse de traitement relativement élevée (temps de traitement total = environ 28,1 min).