Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Intégration du vecteur lentiviral miRNA et efficacité du ciblage génique dans les progéniteurs cardiaques

Mariana Loperfido, Stefania Crippa et Maurilio Sampaolesi

Les cellules souches et progénitrices cardiaques sont un défi pour une éventuelle application en thérapie cellulaire. Plusieurs laboratoires de recherche exploitent la faisabilité de l'approche de thérapie cellulaire autologue pour se débarrasser des traitements immunosuppresseurs responsables d'effets secondaires indésirables. Récemment, nous avons montré que les progéniteurs cardiaques isolés de souris Sgcb null, modèle animal de la dystrophie musculaire des ceintures de type 2E, subissent une différenciation aberrante in vitro et in vivo en raison de la dysrégulation de miR669. Cette famille de miRNA est capable d'inhiber le programme myogénique squelettique en ciblant directement MyoD 3' UTR. En utilisant la technologie lentivirale, nous avons fourni la preuve qu'il est possible de sauver le phénotype dystrophique aberrant par la surexpression de miRNA669 sans correction génique. Cependant, la manière dont les virus porteurs des miRNA étaient positionnés dans le génome lors de la transduction et comment leur site de localisation pouvait influencer le potentiel de sauvetage n'a pas été analysée. Nous étudions ici le profil d'intégration du vecteur lentiviral portant le pré-miR669 dans des populations polyclonales et clonales infectées dérivées de progéniteurs cardiaques Sgcb. Notre étude révèle que les sites d'insertion rétroviraux (RIS) sont largement limités aux gènes codants (65%). Bien qu'avec la limitation de notre analyse, nous n'avons trouvé aucune correspondance pour les gènes liés au cancer et plusieurs RIS séquencés ont mis en lumière des gènes principalement impliqués dans la fonction musculaire. Ainsi, nos données montrent que le profil d'insertion du vecteur lentiviral est spécifique à la cellule, cependant, l'état de la chromatine des cellules cibles influence positivement les intégrations virales.