Journal of Petroleum & Environmental Biotechnology

Abstrait

Clonage moléculaire et expression des gènes de cellulase et de polygalacturonase dans E. coli comme application prometteuse pour la production de biocarburants

Eman Ibrahim, Kim D. Jones, Ebtesam N. Hossenya

0La biomasse lignocellulosique a le potentiel de produire du bioéthanol, un carburant renouvelable. Cependant, la bioconversion de la matière lignocellulosique complexe en sucres simples puis en bioéthanol est un processus difficile. Des travaux récents se sont concentrés sur le génie génétique d'un biocatalyseur qui pourrait jouer un rôle essentiel dans la production de biocarburants. Escherichia coli a été considéré comme un hôte pratique pour les biocatalyseurs dans la production de biocarburants en raison de sa fermentation du glucose en une large gamme d'alcools à chaîne courte et de la production d'hydrocarbures hautement désoxygénés. La bactérie Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum (P. carotovorum) est connue pour sa macération de la paroi cellulaire végétale provoquant une pourriture molle. La capacité de détruire les plantes est due à l'expression et à la sécrétion d'une large gamme d'enzymes hydrolytiques qui comprennent des cellulases et des polygalacturonases. P. carotovorum ATCC™ n° Le gène 15359 a été utilisé comme source d'ADN pour l'amplification de celB, celC et peh. Ces gènes codent respectivement 2 cellulases et une polygalacturonase. Des amorces ont été conçues sur la base de séquences génétiques publiées et utilisées pour amplifier les cadres de lecture ouverts de l'ADN génomique de P. carotovorum. Les produits PCR individuels ont été clonés dans le vecteur d'expression pTAC-MAT-2 et transformés dans Escherichia coli. Les séquences d'acides aminés déduites des gènes clonés ont été analysées pour leurs domaines catalytiquement actifs. L'estimation des poids moléculaires des protéines exprimées a été réalisée à l'aide d'une analyse SDS-PAGE et les produits celB, celC et peh étaient respectivement d'environ 29,5 kDa, 40 kDa et 41,5 kDa. La détermination qualitative des activités cellulasique et polygalacturonase des gènes clonés a été réalisée à l'aide d'essais de diffusion en gélose.