Technologie génétique

Abstrait

Détection et expression moléculaires de l'azurine : une protéine anticancéreuse issue d'isolats locaux d'espèces de Pseudomonas

Aslam F, Farooq A, Qaiser H, Bajwa S, Saleem F et Naz S

L'azurine a été reconnue comme médicament anticancéreux en 2000, elle joue un rôle important dans l'induction de l'apoptose et de la cytotoxicité. L'azurine peut s'incorporer au cytosol et au matériel nucléaire après avoir pénétré dans les cellules tumorales et stabiliser p53 (une protéine suppresseur de tumeur) qui facilite l'augmentation de son niveau à l'intérieur de la cellule. Un fragment amplifié par PCR de 447 pb d'azurine de Pseudomonas aeruginosa a été cloné dans le vecteur de clonage pTG19-T. La séquence d'ADN prédit une préprotéine avec un peptide signal de 19 acides aminés suivi d'une protéine azurine mature de 128 acides aminés. Le gène de l'azurine a été cloné dans le vecteur pET22b. Le vecteur recombinant rpET22b (+)-Azu a été cloné dans des cellules BL21-Codon Plus (DE3). Une expression optimisée et élevée du gène de l'azurine a été obtenue à une concentration de 0,5 mM d'IPTG après 6 heures à 37°C. Le séquençage montre une homologie de séquence de 99,8 % avec la séquence rapportée de l'azurine. Une mutation silencieuse, c'est-à-dire CCA en CCG, est détectée au niveau du 17e acide aminé. Cependant, l'acide aminé résultant (proline) reste le même.