Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Surexpression d'un gène de chitinase du champignon thermophile Thermomyces lanuginosus dans Saccharomyces cerevisiae et caractérisation de la chitinase recombinante

M. Prasad et P. Palanivelu

Un gène de chitinase du champignon thermophile Thermomyces lanuginosus ATCC 44008 a été cloné et surexprimé dans Saccharomyces cerevisiae SEY 2101. La chitinase recombinante a été produite sous forme de protéine sécrétée soluble. L'activité enzymatique s'est avérée maximale le quatrième jour à 30°C dans le milieu d'induction. La chitinase surexprimée a affiché une activité optimale à pH 6,5 et à 60°C. La chitinase recombinante a attribué une thermostabilité remarquable en maintenant plus de 60 % de l'activité enzymatique après 6 h à 50°C. La masse moléculaire de la chitinase surexprimée était de 42 kDa telle que mesurée par SDS-PAGE. Les paramètres cinétiques tels que KM et Vmax de l'enzyme se sont avérés être respectivement de 0,403 mM et 8,74 mmoles/min/mg de protéine. La synthèse de la chitinase recombinante a été fortement réprimée par le glucose. L'inhibiteur de traduction eucaryote, le cycloheximide dans le milieu d'induction, a montré une activité supérieure de 10 % tandis que 30 % de l'activité a été inhibée par des inhibiteurs de transcription, à savoir la 8-azaguanine et la 8-hydroxyquinoline. La chitinase recombinante surexprimée pourrait trouver une application potentielle dans l'industrie pharmaceutique pour préparer des chitooligosaccharides.