Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Production de cellules souches mésenchymateuses dérivées de tissus adipeux équins de qualité conforme aux bonnes pratiques de fabrication à des fins thérapeutiques

Shashank Gowda, Aarya Hari, Basavaraj Chougule, Manoj Kumar Reddy, Abhishek Chandanan, Minita Sodhi, Nicole Koshy, Lyle Fonseca et Satish Totey

Les cellules souches mésenchymateuses (CSM) sont actuellement évaluées dans des études cliniques sur les chevaux pour leur potentiel à traiter divers troubles et blessures. Des études ont montré que les cellules souches autologues et allogéniques semblent toutes deux sûres. Cependant, une méthode d'expansion cellulaire efficace, fiable et rentable est nécessaire pour fournir des cellules souches de qualité clinique prêtes à l'emploi. Notre étude visait à déterminer les conditions de culture optimales pour une expansion efficace des cellules souches à grande échelle. Nous avons produit à grande échelle des cellules souches mésenchymateuses dérivées de tissus adipeux équins conformes aux normes cGMP. Cinq combinaisons de milieux différentes (milieu Eagle modifié de Dulbecco-knockout (DMEM-KO), milieu essentiel minimal modifié alpha (α-MEM), 50:50 DMEM-KO/α-MEM, 75:25 DMEM-KO/α-MEM et 25:75 DMEM-KO/α-MEM) à des densités d'ensemencement de 1000, 2000, 3000, 4000 et 5000 cellules/cm2 ont été utilisées pour déterminer les conditions de culture optimales pour une production à grande échelle. La cinétique de croissance, les immunophénotypes, les caryotypes, la morphologie, la différenciation trilignée, la prolifération des lymphocytes T, la positivité virale, la toxicité préclinique et l'expression des marqueurs de pluripotence ont été analysés. Parmi les combinaisons de milieux et les densités d'ensemencement testées, le DMEM-KO/α-MEM 25:75 à une densité d'ensemencement de 5000 cellules/cm2 s'est avéré optimal pour une expansion à grande échelle. Cette combinaison de milieux a donné un rendement cellulaire significativement plus élevé que les autres combinaisons de milieux, tout en préservant leurs caractéristiques de cellules souches et leur potentiel de différenciation. Les résultats ont indiqué que l'adoption d'un système de culture approprié a considérablement amélioré le rendement cellulaire, permettant ainsi la production de cellules suffisantes pour une application thérapeutique de manière rentable. Les résultats ont également montré que la méthode d'expansion à grande échelle nécessite une manipulation minimale des cellules et qu'elle peut être étendue ex vivo en deux passages tout en conservant les caractéristiques des véritables cellules souches.