Gary W Caldwell et Wensheng Lang
Les 2-arachidonoylglycérols (2-AG) sont l'un des principaux endocannabinoïdes du système nerveux central. La régulation positive de la signalisation des endocannabinoïdes centraux par inhibition sélective de l'activité de la monoacylglycérol lipase cérébrale (MAGL) est une approche thérapeutique potentielle dans la modulation de la douleur, de l'obésité et du diabète, pour n'en citer que quelques-unes. Ainsi, une méthode analytique sensible et fiable pour la détermination des niveaux d'endocannabinoïdes dans le cerveau est essentielle pour la découverte d'inhibiteurs de MAGL. La mesure précise des niveaux de monoacylglycérols (MAG), à l'aide de la chromatographie liquide à ionisation positive par électrospray spectrométrie de masse (LC / +ESI / MS) et de la spectrométrie de masse en tandem, est un défi car les endocannabinoïdes cérébraux sont non seulement sensibles au stress dans la phase de vie de l'étude, mais également sujets au métabolisme post-mortem, à la migration d'acyle (c'est-à-dire à la conversion de 2-MAG en 1(3)-MAG), à la formation d'ions adduits métalliques et à l'hydrolyse chimique générant les mêmes produits que ceux de l'enzyme cible. Pour éviter ces artefacts, nous avons développé une méthode simple LC / + ESI / MS pour la détection directe des cations adduits d'ammonium des principaux MAG en mode de surveillance des ions sélectionnés (SIM). Pour le test d'inhibition de MAGL in vitro, une élution isocratique LC a été utilisée pour la séparation de base des MAG et de leurs isomères de migration d'acyle produits pendant l'incubation à 37 °C avec un homogénat de cerveau de rat. Pour minimiser le métabolisme post-mortem et l'isomérisation des MAG pour les études in vivo, le cerveau de rat a été homogénéisé directement dans quatre millilitres d'éthanol pour chaque gramme de tissu cérébral et une élution par gradient LC linéaire a été appliquée pour un profilage endocannabinoïde large. La méthode SIM LC / + ESI / MS s'est avérée utile pour l'évaluation cérébrale in vitro de la puissance inhibitrice des inhibiteurs de MAGL et de l'hydrolase d'amide d'acide gras (FAAH) et pour l'évaluation cérébrale in vivo pour les études d'engagement de la cible.