Journal de la technologie microbienne et biochimique

Abstrait

Purification, séquençage des acides aminés et thermostabilité d'une estérase extracellulaire de faible poids moléculaire produite par Bacillus Subtilis NRRL 41270 en fermentation

Papagianni M et Papamichael EM

L'activité estérase extracellulaire dans les bouillons de fermentation de Bacillus subtilis NRRL 41270 s'est avérée résider dans une petite protéine avec un poids moléculaire inférieur à 10 kDa. Après purification, l'activité estérase sur le dibutyrate de fluorescéine a été estimée à 12 U/min/mg de protéines. La saturation enzymatique a été observée à une concentration de substrat de 5 μM. L'estérase produite a hydrolysé la tributyrine. Son activité spécifique a été estimée à 17,8 μmol d'acide libéré/min/mg de protéines. La petite protéine a été soumise à une chromatographie d'exclusion de taille, à une électrophorèse sur gel électrolytique (SDS-PAGE) et à un séquençage des acides aminés. L'analyse a révélé une séquence des résidus d'acides aminés suivants : eevaetysfyhitphdystshispapvqffspap, selon laquelle la molécule a 34 résidus d'acides aminés et une masse moléculaire calculée de 3853, ce qui était conforme aux résultats de la filtration sur gel et de l'électrophorèse sur gel électrolytique (SDS-PAGE). L'analyse séquentielle et l'utilisation d'outils bioinformatiques n'ont montré aucune similarité significative avec les protéines connues, mais ont révélé une molécule fortement hydrophobe, avec une conformation hélicoïdale α dans le N-terminal, le reste de la molécule étant riche en feuillets β. L'enzyme s'est avérée thermostable avec plus de 85 % de l'activité d'origine maintenue après 120 h d'incubation à 60°C. L'organisme producteur et les caractéristiques de la microenzyme suggèrent le cas d'un biocatalyseur biotechnologiquement intéressant qui devrait être davantage étudié en termes de stabilité et de caractéristiques de production.