Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Purification des neurones immatures issus de la différenciation de la progéniture des cellules souches neurales à l'aide d'une simple méthode d'agitation

Hassan Azari, Sharareh Sharififar, Roya P Darioosh, Maryam Rahman, Jeff M Fortin et Brent A Reynolds

Objectif : Les populations de cellules neuronales enrichies sont des outils précieux pour les recherches en laboratoire et les applications de thérapie cellulaire. Cependant, les approches de purification cellulaire disponibles nécessitent des équipements coûteux tels que FACS ou MACS qui limitent leur accessibilité universelle. Dans cette étude, nous avons développé une méthode efficace pour purifier les cellules neuronales immatures de la progéniture de cellules souches neurales en différenciation (dNSC) en fonction de leurs propriétés différentielles d'attachement au substrat sans utiliser d'outils coûteux de séparation cellulaire. Méthodes : Les cellules souches neurales ont été récoltées à partir de l'éminence ganglionnaire des cerveaux de souris embryonnaires du jour 14 en utilisant le test des neurosphères. Les neurosphères ont ensuite été dissociées en cellules individuelles et différenciées en utilisant la méthode du test des neuroblastes. Après une brève trypsinisation, la culture de dNSC a été agitée doucement à 150 tr/min pendant 30 min pour détacher les amas de cellules neuronales supérieurs de la monocouche de cellules astrocytaires sous-jacente. Le rendement de purification neuronale, la contamination des astrocytes et la présence de cellules en division ont été comparés à une méthode de purification MACS utilisant l'anticorps PSANCAM. Résultats : Alors qu'un rendement neuronal de 97,1 ± 0,45 % a été obtenu en utilisant la méthode MACS, il a atteint 97,9 ± 0,6 % en utilisant la méthode d'agitation, ce qui n'était pas significativement différent. D'autre part, le pourcentage d'astrocytes dans l'approche MACS était de 1,18 ± 0,15 %, mais il a diminué significativement à 0,6 ± 0,15 % en utilisant la méthode d'agitation. De plus, 4,41 ± 0,23 % et 5,3 ± 0,4 % des cellules isolées dans les méthodes MACS et d'agitation, respectivement, étaient des cellules en division immunoréactives Ki-67, dont 97,34 ± 1,6 % et 97,9 ± 0,7 % co-exprimaient la β III-tubuline, confirmant leur identité neuronale. De plus, sur la base du test de formation de colonies neuronales, la méthode d'agitation a permis de générer une population de cellules neuronales homogène sans aucune contamination par des cellules souches neurales. Conclusions : La méthode de purification par agitation permet une séparation facile, peu coûteuse, efficace et à grande échelle des neurones immatures de la progéniture des cellules souches neurales dérivées, ce qui peut potentiellement bénéficier aux applications de base et cliniques.