Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Quantification des progéniteurs mégacaryocytaires dans les produits d'aphérèse par cytométrie de flux et PCR en temps réel

Leinøe Eva, Nielsen Kaspar R, Baech John, Steffensen Rudi, Dybkaer Karen, Boegsted Martin et Johnsen Hans E.

Contexte et objectifs : L'évaluation de la qualité de la transplantation autologue de cellules souches du sang périphérique (PBSCT) peut être améliorée par le dénombrement des progéniteurs mégacaryocytaires CD34+/CD61+ au sein du greffon. Le dénombrement des sous-ensembles par cytométrie de flux (FC) a été difficile à standardiser en raison d'une faible spécificité qui peut résulter de l'adhérence des plaquettes ou des microsphères. Nous avons cherché à analyser l'adhérence des plaquettes aux cellules souches hématopoïétiques et à établir un test quantitatif de réaction en chaîne par polymérase en temps réel (RT-qPCR) pour les transcrits des gènes CD34 et CD61. L'analyse a été utilisée pour étudier CD34 et CD61 comme prédicteurs de la récupération plaquettaire tardive après PBSCT dans le lymphome non hodgkinien (LNH). Matériel et méthodes : L'analyse FC a été réalisée sur des produits d'aphérèse récoltés pour une transplantation autologue et la microscopie confocale a été appliquée sur des cellules triées. L'évaluation clinique comprenait l'analyse des produits de leucaphérèse de 21 patients consécutifs atteints de LNH traités par thérapie à haute dose et PBSCT. Français La récupération précoce a été définie comme une numération plaquettaire observée > 20 x 10(9)/L avant le jour 12 après la transplantation et la récupération tardive comme une numération plaquettaire observée < 20 x 10(9)/L après le jour 12 après la transplantation. Pour l'analyse RT-qPCR, les cellules CD34+ ont été triées à partir de produits de leucaphérèse décongelés et l'ARN extrait et rétrotranscrit en ADNc pour une analyse plus approfondie des niveaux d'ARNm CD34 et CD61 à l'aide de sondes TaqMan. Résultats : Les cellules CD34+/CD61+ identifiées par FC se sont avérées former un sous-ensemble spécifique, sans signe de plaquettes matures adhérentes. Les cellules CD34+/CD61+ exprimaient des transcrits d'ARNm CD61 non trouvés dans les cellules CD34+/CD61- complémentaires. Aucune corrélation positive entre le dénombrement basé sur FC et l'estimation par analyse RT-qPCR des sous-ensembles de progéniteurs mégacaryocytaires n'a été identifiée. L'évaluation de l'impact clinique en comparant des échantillons de 21 patients avec récupération plaquettaire précoce et tardive n'a révélé aucun impact prédictif pour les ratios d'expression CD61/BACT (β-actine), CD34/BACT ou CD61/CD34 mRNA parmi les cellules triées CD34+. Conclusion et perspective : Un sous-ensemble spécifique de cellules CD34+/CD61+ peut être identifié par analyse FC et RTqPCR ; cependant, le dénombrement de ce sous-ensemble n'était pas corrélé à la récupération plaquettaire après PBSCT. Les futures études sur la valeur prédictive doivent être évaluées dans un groupe de patients avec échec de greffe dans le cadre d'une collaboration internationale au sein du Groupe européen de transplantation de sang et de moelle osseuse (EBMT).