Technologie génétique

Abstrait

Expression de la proinsuline humaine recombinante dans E. Coli par modification de la région 5ʹ non traduite et traduite

Aslam F, Latif K, Waseem R, Naz S et Iftikhar S

L'ARN messager initie le processus de traduction en transférant le code de l'ADN à l'ARN de transfert. Une séquence riche en poly purine appelée séquence Shine-Dalgarno permet de déterminer la position du codon de départ, la séquence Shine-Dalgarno est différente car elle permet au ribosome d'être construit à une position intérieure sur l'ARNm par liaison directe à cette séquence. Le site de liaison ribosomique à l'extrémité 5' du site d'initiation de la traduction est utilisé pour lier la structure secondaire de l'ARNm, la distance entre le RBS et le codon de départ affecte l'efficacité de la traduction d'un gène. Dans cette étude, nous modifions la distance entre le site de liaison du ribosome et le codon de départ pour obtenir les différents ratios d'expression de la traduction. À cette fin, le gène de la proinsuline cloné dans le vecteur pET21a, la distance entre le site de liaison et le codon de départ a été maintenue à 8 nucléotides. À cette distance entre le site de liaison du ribosome (RBS) et le codon de départ, l'expression de la proinsuline était de 30 % des protéines cellulaires totales. Français Lorsqu'il y a 10 nucléotides entre les deux, l'expression diminue jusqu'à 2-4 %. Avec 12 nucléotides entre RBS et le codon de départ, l'expression diminue encore jusqu'à 1-2 %. Comme ces tentatives sont faites au hasard, donc en vérifiant les structures secondaires de l'ARNm par M-fold, on a montré une liaison entre le site de liaison du ribosome et le début du gène de la proinsuline. Une autre tentative a été faite en incorporant dix nucléotides différents au début du gène de la proinsuline pour rendre la structure secondaire de l'ARNm moins stable (ΔG = -5,5) ne modifie pas significativement l'expression de la proinsuline dans les cellules codon BL21 plus. Il existe d'autres facteurs de contrôle de l'expression des protéines, c'est-à-dire que l'instabilité métabolique, la dégradation rapide de l'ARNm ou l'accumulation de protéines peuvent réguler à la baisse l'expression de l'ARNm.