Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Génération de cellules souches mésenchymateuses induites robustes, efficaces et pures à partir de cellules souches pluripotentes induites par ARNm en suspension

Rajneesh Verma, Pornpun Saengmuang, Tanabodee Payuha, Julie D Mendoza, Rotsarin Narang, Naphapatsorn Bondee, Sergei Dmitrievs, Paul Michael Collier

Les cellules souches mésenchymateuses (CSM) sont impliquées dans de nombreux essais cliniques prometteurs visant à lutter contre des maladies extrêmement complexes. De nombreux facteurs déterminent la sécurité de ces essais cliniques, tels que la pureté de la population de cellules CSM dérivées de tissus utilisée dans les thérapies. De plus, l'efficacité des CSM injectées doit être testée in vitro , avant application, par la capacité de prolifération et la reproductibilité sur des passages continus. En outre, il est important de choisir la bonne source de dérivation des CSM pour une thérapie cellulaire et une transplantation réussies. Cette étude démontre une génération robuste de CSM à partir de cellules souches pluripotentes induites (CSPI) de donneurs humains sains (avec un test génétique complet effectué au préalable) en utilisant une méthode non intégrative (ARNm). Cette méthode de conversion comprend (i) la différenciation d'une population d'iPSC en suspension sans iMatrix, (ii) le passage des cellules différenciées à l'étape (i) en présence d'un milieu MSC conditionné pendant une durée et dans des conditions suffisantes pour produire des iMSC en culture à long terme sans signe de mémoire épigénétique.

L'analyse de l'expression des marqueurs pluripotents (Oct-4, SSEA-4, Sox-2, Tra-1-60) a été confirmée par cytométrie de flux et immunocytochimie par évaluation visuelle au microscope à fluorescence. Aucun tératome n'a été développé par injection in vivo de la population iMSC chez les hamsters mâles, confirmant respectivement la pureté transformée des iMSC et la propriété immunomodulatrice en culture sans iPSC. Pour les études du cycle cellulaire et de la sénescence, des iMSC pures in vitro ont été testées par cytométrie de flux en utilisant l'analyse de l'expression CD73, 90 et 105 et comparées aux UC-MSC. Plus tard, les iMSC ont démontré une tri-différenciation des chondrocytes, des ostéocytes et des adipocytes par rapport aux UC-MSC, ce qui pourrait permettre de remédier aux inconvénients de l'utilisation de MSC adultes et ainsi fournir un outil précieux pour une utilisation future dans divers contextes cliniques.