Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrait

Améliorations significatives des performances d'une procédure de chromatographie d'affinité établie utilisée pour purifier un anticorps monoclonal en 100 cycles de purification

Williams Ferro, Rodolfo Valdés, Eutimio Fernández, Yarysel Guevara, Yenisley Medina, Tatiana Álvarez, Andrés Tamayo, Tatiana González, Mayra Wood, Maylín La O, Yodelvis Calvo et Déborah Geada

La chromatographie d'affinité sur protéine A-Sépharose est une méthode très efficace pour la purification des immunoglobulines à usage pharmaceutique. Cependant, l'efficacité de la chromatographie et la durée de vie de cette méthode doivent toujours être ajustées aux conditions de chromatographie spécifiques (source biologique, tampons, débits, propriétés des anticorps, température, concentration en protéines, protocole de nettoyage, etc.). Cette étude visait à démontrer des améliorations dans les performances d'une procédure de chromatographie d'affinité établie utilisée pour purifier l'anticorps monoclonal (mAb) CB.Hep-1 utilisé dans la purification du principe pharmaceutique actif d'un vaccin contre l'hépatite B. En conclusion, la récupération relativement faible du mAb observée dans les conditions du système tampon 150 mM PBS ; pH 8,0/100 mM acide citrique ; pH 3,0 a été attribuée à l'inefficacité du tampon d'élution à perturber complètement les interactions entre la matrice et le mAb. À cet égard, la rétention du mAb CB.Hep-1 dans la matrice a été facilitée par le ligand couplé à la matrice et non par des interactions non spécifiques. Le système tampon glycine-NaOH 1,5 M/NaCl 3 M ; pH 9,0/glycine-HCl 200 mM ; pH 2,5 a amélioré de manière significative la récupération par chromatographie d'affinité sans affecter la pureté de l'anticorps monoclonal, l'homogénéité moléculaire, la fuite de ligand et la teneur en ADN de souris dans 100 cycles de purification. Ainsi, l'application de glycine-NaOH 1,5 M/NaCl 3 M ; pH 9,0/glycine-HCl 200 mM ; pH 2,5 comme système tampon a permis de réduire les coûts de l'anticorps monoclonal CB.Hep-1 et du vaccin contre l'hépatite B, respectivement.