Journal de bioéquivalence et de biodisponibilité

Abstrait

Quantification simultanée de la vitamine D-2, de la vitamine D-3 et de leurs métabolites 25-hydroxy dans le plasma humain par chromatographie liquide haute performance

Syed N Alvi, Ahmed Yusuf et Muhammad M Hammami

Une méthode simple et fiable de chromatographie liquide haute performance (HPLC) pour la détermination simultanée de la vitamine D-2 (VD-2), de la vitamine D-3 (VD-3), de la 25-hydroxyvitamine D-2 [25 (OH) VD-2] et de la 25-hydroxyvitamine D-3 [25 (OH) VD-3] dans le plasma humain a été développée et validée. Les échantillons de plasma ont été déprotéinés avec un mélange de méthanol et de 2-proponol, puis extraits avec de l'hexane. Après évaporation, le résidu a été dissous dans du méthanol:eau (9,6:0,4, v/v), centrifugé, puis une solution claire a été injectée sur une colonne Zorbax C18. La phase mobile (mode d'élution par gradient) est constituée de méthanol, d'acétonitrile et d'eau (pH = 3,0) ; les éluants ont été surveillés par un détecteur à barrette de photodiodes (longueur d'onde réglée à 265 nm). Français La relation entre la concentration de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, 25(OH) VD-3 dans le plasma et leur rapport de surface de pic à l'IS était linéaire sur la plage de 5 à 100 ng/mL. Les coefficients de variation pour les analyses inter-journalières et intra-journalières étaient tous ≤ 9,7 % et les biais ≤ 13,1 %. Les récupérations d'extraction moyennes de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 et 25(OH) VD-3 à partir du plasma étaient toutes supérieures à 80 %. La méthode a été appliquée à la détermination des taux de vitamine D dans le plasma obtenu à partir de sujets sains. En outre, elle a été utilisée pour évaluer la stabilité de VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2 et 25(OH) VD-3 dans le plasma dans diverses conditions rencontrées en laboratoire clinique.