Journal of Biomolecular Research & Therapeutics

Abstrait

Purification simultanée du FVIII/vWF humain et inactivation du virus combinées dans une colonne chromatographique

Sergiy P Havryliuk, Ievgenia M Krasnobryzha, Olena S Havryliuk et Georgii L Volkov

Il est bien connu que la diminution du nombre de degrés de liberté empêche la dénaturation des protéines. Dans l'étude précédente, nous avons montré que la protéine de liaison au gel chromatographique peut servir d'agent réduisant le nombre de degrés de liberté de la protéine. De plus, la capacité dynamique élevée des nouveaux gels développés a permis une rétention satisfaisante du peptide/protéine à température élevée du processus chromatographique. Ces deux facteurs ont permis la mise en œuvre de l'inactivation du virus pour le peptide (fragment de streptokinase SK1-61) et une protéine de faible poids moléculaire (lysozyme du lait) et une protéine de poids moléculaire moyen (enzyme fibrinogénolytique du venin de serpent) directement dans la colonne pendant l'isolement des cibles. L'objectif de cette étude était d'étudier la possibilité de sauvegarder l'activité du complexe de poids moléculaire élevé FVIII/vWF, lié par échange d'ions et gels d'affinité pendant l'inactivation du virus directement dans la colonne chromatographique. Un autre objectif était de montrer que l'adsorbant de protéine de liaison peut servir de « tamis » fiable pour le lavage mécanique des virus infectieux. En utilisant diverses approches chromatographiques, photométriques et RT-PCR, il a été découvert que la capacité dynamique élevée, qui détermine la capacité de l'adsorbant à dépendre de la température élevée, permettait de réaliser le complexe d'inactivation virale FVIII/vWF par traitement solvant/détergent directement dans la colonne chromatographique à une température de 40-50°C pendant une longue période de 3 à 5 heures. L'activité biologique du FVIII a été complètement préservée ; les virus enveloppés et non enveloppés ont été efficacement éliminés. Le niveau d'élimination du virus de modélisation était suffisant pour une inactivation complète des virus, ce qui nous a permis de recommander cette méthode pour l'utilisation dans l'industrie pharmaceutique.