Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Transactivation de l'expression du gène cible par le SALL4B recombinant : un marqueur de cellules souches pluripotentes

Mengru Yuan, Yun Wang, Zhihua Ren, Wei Dai et Yongping Jiang

SALL4 est un facteur de transcription important qui favorise l'expansion des cellules souches hématopoïétiques. L'expression de SALL4 est également dérégulée dans plusieurs types de leucémie . Des études récentes révèlent que SALL4B, un isoforme majeur de SALL4, est fortement modifié par des mécanismes post-traductionnels et que ces modifications sont essentielles à leur stabilité, à leur localisation subcellulaire et à leurs activités transcriptionnelles. Étant donné l'importance de SALL4B dans le soutien de l'auto-renouvellement et de l'expansion des cellules souches, nous avons optimisé un processus d'expression et de purification à grande échelle pour obtenir SALL4B en utilisant le système de vecteur d'expression du baculovirus. Le TAT-SALL4B recombinant a été efficacement purifié par chromatographie d'affinité au nickel dans des conditions natives. L'immunotransfert a confirmé que le SALL4B recombinant était fortement exprimé et purifié. Comme première étape pour tester l'activité biologique du TAT-SALL4B purifié, nous avons étudié si le TATSALL4B, directement ajouté au milieu de culture, était capable de pénétrer dans les cellules par le biais du processus de transduction protéique. La microscopie à fluorescence a révélé que la protéine recombinante TAT-SALL4B se localisait spécifiquement dans le noyau de manière dépendante de la concentration et du temps. Les tests de gènes rapporteurs ont montré que la protéine TAT-SALL4B purifiée activait le promoteur du gène OCT4, indiquant que la protéine recombinante SALL4B était transcriptionnellement active in vivo. Ensemble, nos résultats suggèrent que la protéine TAT-SALL4B pourrait constituer un facteur prometteur pour soutenir l'expansion ex vivo des cellules souches hématopoïétiques .