Journal de bactériologie et parasitologie

Abstrait

Activation transcriptionnelle par une séquence de type URE4 dans le promoteur central du gène EhPgp1

ME Ramírez, DG Pérez, E Náder et C Gómez

EhPgp1 ​​est l'un des gènes de résistance multiple aux médicaments exprimés dans les trophozoïtes résistants aux médicaments d'Entamoeba histolytica. Des études antérieures dans notre laboratoire ont démontré que deux sites C/EBP participent à l'activation transcriptionnelle de ce gène. Cependant, il existe une autre région pertinente qui régit également la régulation de l'expression d'EhPgp1 ​​dans le clone C2. Dans ce rapport, nous apportons la preuve que la transcription du gène EhPgp1 ​​est au moins partiellement régulée par les séquences répétées R9 agissant en cis et la protéine EhEBP1. L'analyse structurale de la région de -234 à -197 pb montre la présence de deux séquences répétées de 9 pb [R9(1) et R9(2)] situées à -226 à -203 pb. L'analyse des délétions et des mutations des motifs R9 a réduit de manière significative l'activité du promoteur dans les trophozoïtes du clone C2. Les expériences EMSA ont révélé une liaison spécifique des protéines nucléaires d'E. histolytica à la séquence R9. Les tests de compétition ont montré que la présence de plus d'une séquence R9 est nécessaire pour une forte interaction ADN-protéine. De plus, des expériences de Western blot avec des protéines partiellement purifiées interagissant avec le motif R9 et des anticorps contre EhEBP1 ont reconnu une protéine de 28 kDa. Il est intéressant de noter que cet anticorps dans les tests de supershift a empêché la formation d'interactions ADN-protéine des séquences R9 et des protéines nucléaires d'amibes, indiquant que l'une des protéines qui interagissent avec l'élément R9 est une protéine de type EhEBP1. En conclusion, nous démontrons que les motifs R9 sont reconnus par une protéine EhEBP1 et activent l'expression du gène EhPgp1.