Journal de recherche et de thérapie sur les cellules souches

Abstrait

Transdifférenciation des cellules souches mésenchymateuses de rat en neurones dopaminergiques pour la transplantation cellulaire

Ryan M. Welchko, Travis D. Hulse, Sabrina S. Dieffenbach, Gabrielle P. Shall, Huo Wangjing, Leslie R. Siegal, Jared R. Watters, Leveque T. Xavier, Ming Lu, Julien Rossignol, Michael I. Sandstrom et Gary L. Dunbar

Objectif : La transplantation de progéniteurs dopaminergiques embryonnaires humains dans les striata de patients atteints de MP a donné des résultats encourageants, mais les préoccupations éthiques et la disponibilité des tissus limitent cette approche. L'utilisation de cellules souches mésenchymateuses (MSC) fournit une source de cellules facilement disponible, car elles sont dérivées de tissus adultes. Cette étude in vitro a exploré l'utilisation de MSC comme source de cellules pour l'induction neuronale DA en utilisant un seul adénovirus.
Méthodes : Notre laboratoire a développé un nouvel adénovirus exprimant plusieurs gènes viraux 2A permettant l'expression polycistronique de plusieurs gènes (Ascl1, Lmx1a et Nurr1) pour les facteurs de transcription impliqués dans la différenciation des neurones DA et a utilisé le gène de la protéine fluorescente verte (gfp) pour suivre la transfection. Les MSC ont été cultivées avec l'adénovirus, les changements morphologiques ont été surveillés ainsi que l'expression de la gfp comme en témoigne la microscopie à fluorescence. Français La présence de l'ADN viral dans les cellules transfectées a été confirmée par PCR, immunocytochimie et RTPCR.
Résultats : Les MSC cultivées avec l'adénovirus ont entraîné des changements morphologiques ainsi qu'une expression de gfp comme en témoigne la microscopie à fluorescence. La présence de l'ADN viral dans les cellules transfectées a été confirmée par PCR. Les analyses d'immunocytochimie et de RT-PCR ont révélé que les cellules exprimant gfp ont un co-étiquetage nucléaire des facteurs de transcription traduits LMX1a et NURR1, ainsi qu'une régulation positive de ces gènes, ainsi qu'une régulation positive des cibles géniques en aval, telles que la tyrosine hydroxylase (TH) et le transporteur de la dopamine (DAT).