Biochimie & Biochimie Analytique

Abstrait

Évaluation des dommages à l'ADN double brin par spectroscopie Raman

Auner AW et Thomas JC

Les cassures d'ADN double brin [DSB] et la réparation ultérieure peuvent corriger les dommages de l'ADN ou peuvent provoquer par erreur des mutations conduisant à des dommages cellulaires et à des maladies. Les DSB peuvent être mesurées par spectroscopie Raman , en utilisant une lumière diffusée inélastique résultant de vibrations moléculaires distinctes provenant d'échantillons d'ADN purifiés. Avec un temps d'exposition de 20 s et 2 accumulations, l'analyse Raman a révélé que les vibrations circulaires de l'ADN plasmidique pBS KS+ étaient similaires au contrôle à blanc aqueux. La restriction du site EcoR1 unique pBS KS+ a créé un ADN linéaire et des augmentations significatives des pics Raman à 880, 1044, 1084 et 1458 cm ^-1 . Pour explorer plus en détail la détection Raman des dommages à l'ADN, des lymphocytes Jurkat humains ont été cultivés dans +/- 16 μg/ml de Bleocin™. L'ADN des cellules traitées à la Bleocin ^™ a montré une absorption Raman améliorée à 880, 1044, 1084 et 1458 cm ^-1 par rapport aux cellules non traitées. Les cellules Jurkat sont déficientes en termes de capacité à exprimer la protéine pro-apoptotique Bax et p53, mais l'exposition à la Bleocin ^™ a augmenté les niveaux de TAp73, et par la suite la mort cellulaire. En raison de la faible interférence dans les matériaux biologiques et de la sensibilité élevée, la spectroscopie Raman est une méthode rapide et simple pour estimer comparativement l'étendue des DSB relatives. Contrairement aux tests de comètes, qui nécessitent l'analyse de cellules vivantes et mourantes, l'ADN isolé peut être facilement récupéré à partir de pratiquement n'importe quelle cellule, stocké et l'analyse des DSB effectuée ultérieurement.