Biochimie & Biochimie Analytique

Abstrait

Clairance de l'héparine par les récepteurs éboueurs du foie

Edward N. Harris

Les laboratoires HTS ont développé une gamme de technologies de dosage pour la liaison et la signalisation afin d'identifier les composés clés ou principaux agissant sur les récepteurs GPCR. Le dosage de la liaison [35S] GTPγS reste une technique utile et simple pour démontrer l'activation des récepteurs et est l'un des rares dosages fonctionnels sans cellules. Cependant, sa nature radioactive impose des limites claires à son utilisation dans la pratique courante en laboratoire et dans les expériences à haut débit. Nous avons développé ici une nouvelle version non radioactive du dosage utilisant un analogue du GTP marqué à l'europium dans lequel la liaison europium-GTP peut être dosée à l'aide d'une fluorescence à temps résolu. Dans la continuité de nos efforts, ce dosage a été adapté aux récepteurs de l'histamine 3. Le format du dosage a été spécifiquement évalué en testant des agonistes connus de l'histamine 3 (Imetit, Immepip, Methylhistamine, Proxifan et Histamine) et des antagonistes (GSK189254, Clobenpropit et Thioperamide). Dans des conditions d'essai optimisées, les puissances (pEC50 et PKB) dans l'essai de liaison sont en bon accord avec celles obtenues précédemment dans l'essai d'activité fonctionnelle isotopique. L'essai de liaison Eu-GTP s'est avéré très robuste (facteur Z' 0,84) avec un pourcentage élevé par rapport aux comptages de base. Cet essai peut être utilisé comme composant de la cascade de criblage pour le criblage des antagonistes du récepteur de l'histamine 3.