Biochimie & Biochimie Analytique

Abstrait

Détection rapide de protéines par électrophorèse sur gel de polyacrylamide unidimensionnel à l'aide d'un azurant optique fluorescent peu coûteux

Sashidhar RB, Tanuja Kosuri et Sujata Nayak

Un azurant optique fluorescent commercial pour tissu, Ranipal ^® (F-OB), a été utilisé avec succès pour colorer les protéines sur gel natif et SDS -1D-PAGE. Le F-OB a été purifié en utilisant un système de solvant biphasique de dichlorométhane et d'eau. La valeur R _f (0,63) du F-OB purifié et brut était comparable sur CCM. La spectrométrie de masse du F-OB purifié a indiqué un pic de base à 414 (m/z). Les maxima d'absorption et d'émission du F-OB se sont avérés être respectivement de 350 nm et 430 nm. Le F-OB pouvait colorer les protéines avant et après l'électrophorèse, sur gel natif. La coloration post-électrophorétique était rapide et nécessitait 20 min pour visualiser les protéines colorées. D'autre part, dans les gels SDS, 20 min supplémentaires étaient nécessaires pour l'extraction du SDS avant la coloration des protéines avec le F-OB. On a constaté que le SDS interférait avec la liaison du F-OB aux protéines. Des concentrations variables de marqueurs de poids moléculaire ont été chargées et leur intensité de fluorescence a été tracée en fonction de la concentration des protéines. Les valeurs de r ² variaient de 0,965 à 0,997 indiquant une excellente linéarité. La détection de l'anhydrase carbonique était dans la plage de 8,0 à 800 ng. Contrairement à la plupart des colorants utilisés pour la coloration des protéines, la coloration avec F-OB pouvait être effectuée dans un tampon de cuve (2 mg/100 mL) et était également réversible. Le F-OB serait peut-être le colorant fluorescent le plus rentable pour colorer les protéines (0,04 USD/25,0 g). Le F-OB s'est avéré être un colorant fluorescent simple, sûr, sensible, moins chronophage et économique comme alternative pour la coloration des protéines sur des gels de polyacrylamide.