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Abstrait

Méthode HPLC-UV courte et robuste pour déterminer la concentration sérique de ribavirine sans étape d'évaporation

Abdul Rafiq Khan, Ali Al-Othaim, Khalid Muhammed Khan, Shazia Mrtaza, Sara Altraif, Waleed Tamimi, Waqas Jamil et Ibrahim Altraif

Objectif : La mesure de la ribavirine (RBV) est importante pour le suivi thérapeutique des patients atteints d'hépatite C. Une méthode simple et rapide de chromatographie liquide haute performance (HPLC) a été développée et validée pour mesurer la concentration de ribavirine dans des échantillons de sérum sans étape d'évaporation.

Conception et méthode : Environ 500 μl d'échantillon de sérum, 50 μl d'étalon interne et 20 mM de tampon d'acétate d'ammonium (pH = 8,5) ont été mélangés pendant 30 secondes et centrifugés. Le surnageant a été transféré dans des cartouches d'acide phénylboronique préconditionnées pour une extraction en phase solide. Toutes les cartouches ont été lavées deux fois avec 1 ml de tampon d'acétate d'ammonium 20 mM sous vide ne dépassant pas 10 psi. La ribavirine et l'étalon interne ont été élués avec 300 μl d'acide formique à 3 %. Une aliquote de 100 μl a été injectée dans le système HPLC.

Résultats : La méthode était linéaire dans la plage de 0,1 à 8,0 mg/l avec 0,05 mg/l comme limite de détection. Le coefficient de corrélation de comparaison des méthodes était de 0,975 avec une valeur p de 0,116 montrant une bonne reproductibilité des résultats. La précision moyenne a été vérifiée à trois concentrations différentes et s'est avérée être comprise entre 107 et 110 % pour les trois niveaux. L'efficacité d'extraction était de 65,5 % pour la ribavirine dans la plage de 0,1 à 8,0 mg/l et de 71,2 % pour l'étalon interne à 50 mg/l. Les précisions intra-essai ont été déterminées à 0,5, 2,5 et 5,0 mg/l et le % CV s'est avéré être de 2,2 %, 5,0 %, 4,5 % respectivement. La reproductibilité de l'injection à trois niveaux était de 5,5 %, 6,1 % et 3,3 %. La suppression de l’écoulement par gravité et de l’étape d’évaporation a rendu cette méthode plus rapide et plus facile pour l’analyse de routine des échantillons de ribavirine.

Conclusion : La nouvelle méthode HPLC est plus rapide, précise et sensible. Elle a été utilisée pour déterminer le taux de ribavirine sérique chez les patients atteints d'hépatite C dans notre hôpital.