Biochimie & Biochimie Analytique

Abstrait

Voie de développement lent de la TK-RNase H2 hyperthermophile examinée par protéolyse pulsée à l'aide de protéines mutantes

Kanako Shima, Ai Nagao, Jun Okada, Satoshi Sano et Kazufumi Takano

Le dépliement de la ribonucléase H2 de l'archée hyperthermophile Thermococcus kodakarensis (Tk-RNase H2) est remarquablement lent. Dans des travaux antérieurs, les intermédiaires de dépliement de la Tk-RNase H2, les états IA, IB, IC et ID, ont été observés par analyse de protéolyse pulsée à 25 °C, où les états IB et IC sont les principales formes du processus de dépliement lent de cette protéine. Ici, nous avons examiné la voie de dépliement lent de la Tk-RNase H2 par protéolyse pulsée en utilisant des mutants. Pour la variante stabilisée, D7N, la durée de vie des états IA et IB a diminué mais l'état IC est apparu plus tôt à 25 °C, indiquant la stabilisation de l'état IC. Les états IA et IB n'ont pas été observés dans la variante déstabilisée, L33A, à 25°C, alors que dans le type sauvage, ces deux états ont disparu à 50°C. Nos résultats suggèrent qu'à des températures plus élevées, l'état IC est l'état natif réel de la Tk-RNase H2, alors que les états natifs IA et IB à 25°C sont des formes artificielles à des températures plus basses.